En esta secuela de Noche en el Museo, el Museo de Historia Natural cierra sus puertas para una restauración, y todos los artículos exhibidos se guardan en el Archivo Federal en Washington, D.C. Larry Daley (Ben Stiller) es un hombre nuevo. Atrás queda su mal remunerado trabajo como vigilante nocturno del Museo de Historia Natural. Ahora se dedica a hacer publirreportajes, y la verdad es que le va bastante bien. Cobra lo que merece y no le hacen pregunta